TH-Q320非洲豬瘟檢測儀是【天合環(huán)境】根據(jù)市場需求研發(fā)的實時檢測反應(yīng)的儀器,主要由基因擴(kuò)增熱循環(huán)組件、微量熒光檢測光學(xué)系統(tǒng)、微電路控制系統(tǒng)、計算機(jī)及應(yīng)用軟件組成。
產(chǎn)品特點:
1.體積小,重量輕
整機(jī)外尺寸:寬*深*高:235×385×175mm,總重量僅5.7kg
2.升降溫速率
采用Marlow公司PCR專用大功率半導(dǎo)體制冷片,在保證100000次循環(huán)的壽命條件下,為模塊提供更高的升降溫速率
3.控溫精度
采用全新的控溫算法為模塊控溫提供更高的控制精度和準(zhǔn)確度
4.溫度均勻性
全新設(shè)計的加熱體,模擬加熱體結(jié)構(gòu)熱量分布,為模塊提供更好的溫度均勻性
5.高激發(fā)效率
采用CREE公司的高亮度長壽命LED作為激發(fā)光源,以低損耗玻璃光纖作為傳導(dǎo)介質(zhì),為試劑提供更高的激發(fā)光能量
6.高靈敏度
采用歐司朗高靈敏度,高信噪比光電二極管對微弱輻射熒光信號進(jìn)行采集,為熒光檢測提供更高的靈敏度
7.激發(fā)采集波段靈活可變
標(biāo)配四色熒光,熒光波段可根據(jù)客戶需求進(jìn)行選擇,光譜波段更靈活,更好地匹配各廠家的熒光染料與探針
非洲豬瘟檢測儀操作步驟:
1、病毒DNA的提取(使用A盒)
(1)待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數(shù)總和用n表示,取n個滅菌的1.5 mL離心管,逐管編號。
(2)每管加入BufferA500mL。
(3)每管分別加入已處理的待檢樣品、陽性對照、陰性對照各200mL,充分混勻,室溫放置10分鐘。
(4)取與上述離心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管,編號。將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移至DNase-Free吸附柱,(為避免堵塞吸附柱,盡量不要吸懸浮雜質(zhì))。
(5)用高速離心機(jī)設(shè)置13000 r/min室溫離心30秒。
(6)棄去收集管液體,將吸附柱放回收集管中。
(7)吸附柱內(nèi)加入600 μL Buffer B,13000 r/min離心30秒。
(8)棄去收集管液體,將吸附柱放回收集管中。
(9)重復(fù)步驟(7),(8)。
(10)13000 r/min空柱離心2分鐘,去除殘留液。
(11)將每個吸附柱分別移入新的1.5mL離心管中,向柱中央加入50μL Buffer C,室溫靜置1分鐘,13000 r/min離心30秒,離心管中液體即為模板DNA。獲得的DNA溶液,冰上保存?zhèn)溆茫ㄗ⒁馓崛〉腄NA須在2h內(nèi)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,若需長期保存須放置-80℃冰箱,但應(yīng)避免反復(fù)凍融)。
2、熒光PCR擴(kuò)增(使用B盒)
(1)從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、Taq酶,室溫融化后,2 000 r/min離心5秒。設(shè)所需PCR管數(shù)為n(n = 樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系需要20 μL 熒光PCR反應(yīng)液和0.5 μL Taq酶。計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積小管中,充分混合均勻后,向每個PCR管中各分裝20μL。
(2)分別向上述PCR管中加入(11)中制備的DNA溶液各5μL,蓋緊管蓋,500 r/min 離心30秒。
(3)將加樣后的PCR管放入熒光PCR檢測儀內(nèi),作好標(biāo)記。反應(yīng)參數(shù)設(shè)置:
第一階段,預(yù)變性95℃/3分鐘
第二階段,95℃/15秒,52℃/10秒,60℃/35秒共45個循環(huán)。熒光收集在第二階段每次循環(huán)的60℃延伸時進(jìn)行。
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